The present invention relates to a method to perform biochemical reactions and a combination of a capillary (3) and a reaction vessel (1) for use in said method. The reagent capillaries (3) contain frozen reagents (6-13) separated from each other by air or an inert fluid. At use, the reagent capillaries (3) are placed in a reaction vessel (1) to be thawed and then the contents are centrifugated to the bottom of the reaction vessel (1). The invention is intended for use in all types of biochemical standard reactions and diagnostic tests in which the reagents cannot be mixed in advandce. It is particularly suitable for PCR diagnostics but is also especially beneficial when handling radiactive reagents, e.g. labeled nucleotides, at sequencing reactions, etc.
Description Translated from Swedish465 086 2 Fördelarna med PCR i förhållande till känd teknik är framförallt att en mycket liten provmängd behövs, att provet ej behöver vara rent samt att stora mängder DNA kan erhållas på relativt kort tid eftersom användning av mikroorganismer för förökning ej längre är nödvändigt. 465 086 2 The advantages of PCR over prior art are above all that a very small amount of sample is needed, that the sample does not have to be pure and that large amounts of DNA can be obtained in a relatively short time since the use of microorganisms for reproduction no longer is necessary.
En nackdel med PCR-tekniken, som föreliggande uppfinnare avser att lösa, är att steg 1) är tids- och arbetskrävande, framförallt p.g.a. att reagensen inte kan blandas i förväg, och därmed ger upphov till många felkällor. Det är mycket viktigt att steg 1) sker med stor noggrannhet och hög precision eftersom amplifie- ringen i steg 2) och detektionsresultaten i steg 3) är helt beroende av tillförlitligheten av steg 1).A disadvantage of the PCR technique to which the present inventors relate to solve, is that step 1) is time-consuming and labor-intensive, above all p.g.a. that the reagents can not be mixed in advance, and thus give causing many sources of error. It is very important that step 1) takes place with great accuracy and high precision because the ring in step 2) and the detection results in step 3) are complete depending on the reliability of step 1).
Preparationen av reaktionsblandningen för den senare PCR- reaktionen går idag till så att en person först beräknar beredningsmängder för analysen, därefter märker upp reaktionskärl (små rör, vanligen Eppendorfrör), tinar upp sju stycken olika reagens, blandar dessa med hjälp av pipetter av tre olika storlekar, steriliserar detta med UV-ljus, tar fram fryst Taq- polymerasenzym, tillsätter detta, skakar maskinellt, droppar på mineralolja, och slutligen tillsätter provet som ska undersökas.The preparation of the reaction mixture for the latter PCR the reaction today is that a person first calculates preparation amounts for the assay, then label reaction vessels (small tubes, usually Eppendorf tubes), thaw seven different pieces reagents, mix these using pipettes of three different sizes, sterilizes this with UV light, produces frozen Taq- polymerase enzyme, adds this, shakes mechanically, drips on mineral oil, and finally add the sample to be examined.
Hela detta arbete utförs i en s.k. sterilbänk (ett sorts dragskåp). Personen måste inte bara bära handskar utan tvingas dessutom byta dessa ca 15 gånger för att bereda lO prov.All this work is performed in a so-called sterile bench (a kind fume cupboard). The person must not only wear gloves but be forced in addition, change these about 15 times to prepare 10 samples.
Provrören öppnas med speciellt instrument, ett exemplar för varje prov, vilka rengörs mellan varje omgÃ¥ng prover. Reagensen som används är: PCR-buffert (t.ex. den som säljs av' Pharmacia AB, Uppsala, Sverige) de fyra dNTP:erna tvÃ¥ primers (oligonukleotider) Taq-polymeras (frà n mikroorganismen Thermus aquaticus)°' Under dessa olika moment finns risk för korskontamination mellan de olika reaktionskärlen eller -rören. Vidare finns det risk för _.._.._»5 ...m- Ã. 465 oss-'I' s.k. carry over-kontamination frÃ¥n personen som hanterar proverna. Detta är särskilt pÃ¥tagligt vid rutinañalys för att detektera ett specifikt DNA om samma person utför alla stegen före PCR-reaktionen och hanterar PCR-produkten. PÃ¥ hud, hÃ¥r och laboratorieklädsel kan det förekomma rester'av PCR-produkter frÃ¥n tidigare gjorda amplifieringar, vilket ger upphov' till s.k. falskt positiva resultat. Risken för falskt positiva resultat ökar ju känsligare testen är. Testen för HIV är mycket känslig och det behöver inte nämnas att ett falskt positivt resultat orsakar onödigt obehag för individen som fÃ¥r detta besked. _ \.The test tubes are opened with a special instrument, one copy for each samples, which are cleaned between each round of samples. The reagent as used are: PCR buffer (eg the one sold by 'Pharmacia AB, Uppsala, Sweden) the four dNTPs two primers (oligonucleotides) Taq polymerase (from the microorganisms Thermus aquaticus) ° ' During these different steps, there is a risk of cross-contamination between the various reaction vessels or tubes. Furthermore, there is a risk of _.._.._ »5 ... m- Ã. 465 us-'I ' s.k. carry over-contamination from the person handling proverna. This is especially evident in routine analysis to detect a specific DNA if the same person performs all the steps before the PCR reaction and handles the PCR product. On skin, hair and laboratory attire, there may be residues of PCR products from previously made amplifications, which gives rise to so-called false positive results. The risk of false positive results increases the more sensitive the test is. The test for HIV is very sensitive and it need not be mentioned that a false positive result causes unnecessary discomfort to the individual receiving this message. _ \.
För att lösa problemet med falskt positiva resultat har man föreslagit en rad åtgärder. I första hand, naturligvis, att upprepa försöken för att säkerställa resultaten. För att undvika carry over har man föreslagit användning av ansiktsmask, hårskydd, glasögon med flera skydd. För att undvika korskontami- nation har man föreslagit att särskilja momenten genom att utföra ännu fler moment och att bereda PCR-preparationerna i ett rum och utföra amplifieringarna i ett annat och/eller att låta olika personer utföra de olika stegen av PCR-tekniken.To solve the problem of false positive results, one has proposed a series of measures. In the first place, of course, that repeat the experiments to ensure the results. To avoid carry over, the use of a face mask has been suggested, hair protection, glasses with several protections. To avoid cross-contamination nation, it has been proposed to distinguish the elements by performing even more steps and to prepare the PCR preparations in a room and perform the amplifications in another and / or sound different people perform the various steps of PCR technology.
De föreslagna åtgärderna minskar visserligen risken för falskt positiva resultat men de förekommer fortfarande i otillfredsstäl- lande utsträckning och testerna är ännu ej 100% tillförlitliga.Admittedly, the proposed measures reduce the risk of fraud positive results but they are still unsatisfactory. to a large extent and the tests are not yet 100% reliable.
Vidare är de tids- och arbetskrävande samt kräver stora kostnader för engångsmaterial.Furthermore, they are time-consuming and labor-intensive and require large costs for disposable materials.
Därför var det föreliggande uppfinnings uppgift att skapa reagenskapillärer avsedda att införas i reaktionsrör eller -kärl för användning framförallt vid PCR-teknik, vilka reagen- skapillärer undviker nackdelarna med tidigare känd teknik och är dessutom arbets- och tidsbesparande. ~ Denna uppgift löses genom de kännetecknande delarna till krav l, respektive 5. 465 086 Uppfinningen kommer nu att beskrivas närmare nedan i anslutning till de bifogade ritningarna, i vilka Figur 1A är en schematisk vy av ett reaktionskärl innefattande en reagenskapillär med reagens; Figur-lB är en schematiskt vy av en alternativ utföringsform av ett reaktionskärl innefattande en alternativ utföringsform av en reagenskapillär; Figur 1C är en planvy av den i figur 1B visade utföringsformen; Figur ZA visar den i figur lA visade reagenskapillären i större skala; I Figur 2B visar den i figur lB visade reagenskapillären i större skala; och Figur 3 visar schematisk ett föredraget beredningssätt av reagenskapillärerna enligt uppfinningen.Therefore, it was the object of the present invention to create reagent chillers intended to be introduced into reaction tubes or vessels for use primarily in PCR technology, which reagents capillaries avoid the disadvantages of prior art and are in addition, labor and time savings. ~ This task is solved by the characterizing parts of claim 1, respectively 5. 465 086 The invention will now be described in more detail below in connection to the accompanying drawings, in which Figure 1A is a schematic view of a reaction vessel comprising a reagent chiller with reagents; Figure 1B is a schematic view of an alternative embodiment of a reaction vessel comprising an alternative embodiment of a reagenskillär; Figure 1C is a plan view of the embodiment shown in Figure 1B; Figure ZA shows the reagent capillary shown in Figure 1A in larger form scale; IN Figure 2B shows the reagent capillary shown in Figure 1B in larger scale; and Figure 3 schematically shows a preferred formulation method of the reagent capillaries of the invention.
I figur 1A visas ett färdigpreparerat reaktionskärl 1 enligt föreliggande uppfinning. Inuti reaktionskärlet 1, t.ex. ett Eppendorfrör, är en reagenskapillär 3 insatt. Reagenskapillären 3 är försedd med olika reagens, vilket kommer att beskrivas närmare nedan. I reaktionskärlets 1 botten kan finnas vatten eller buffert 2 för senare utspädning av reagensen.Figure 1A shows a ready-prepared reaction vessel 1 according to present invention. Inside the reaction vessel 1, e.g. one Eppendorf tube, a reagent capillary 3 is inserted. Reagenskapillären 3 is provided with various reagents, which will be described further below. There may be water in the bottom of the reaction vessel 1 or buffer 2 for later dilution of the reagents.
I figur lB visas en alternativ utföringsform av ett reaktionskärl 1 och en reagenskapillär 3. Reaktionskärlet 1, som är av Eppendorf-typ, har ett lock 4 med en borrning 4a. Borrningen 4a är täckt av ett permeabelt membran 4b. Den membranförsedda borrningen 4a är centrerad i locket 4, vilket framgår ur figur 1C. Borrningen 4a bildar en stoppkrage för reagenskapillären 3 enligt figur 2B, vilket kommer att beskrivas närmare nedan. f. 465 oss"f 5 Den i figur 2A visade reagenskapillären 3 är avsedd att införas i det i figur 1A visade reagenskärlet 1. Reagenskapillären 3 är försedd med olika reagens 6-13 för en specifik PCR-reaktion.Figure 1B shows an alternative embodiment of a reaction vessel 1 and a reagent capillary 3. The reaction vessel 1, which is off Eppendorf type, has a lid 4 with a bore 4a. Bore 4a is covered by a permeable membrane 4b. The diaphragm the bore 4a is centered in the lid 4, as can be seen from the figure 1C. The bore 4a forms a stop collar for the reagent capillary 3 according to Figure 2B, which will be described in more detail below. f. 465 oss "f 5 The reagent capillary 3 shown in Figure 2A is intended to be inserted in the reagent vessel 1 shown in Figure 1A provided with different reagents 6-13 for a specific PCR reaction.
Mängderna av varje reagens är beräknade och avsedda endast för denna specifika reaktion och överst finns PCR-buffert, därefter följer de fyra dNTP:erna (dCTP, dGTP, dATP, dTTP) och de två oligonukletiderna och slutligen enzymet Taq-polymeras. Mellan reagensen finns luft eller ett inert fluidum. Naturligtvis är även en annan inbördes ordning tänkbar.The amounts of each reagent are calculated and intended for this specific reaction and at the top is PCR buffer, then follows the four dNTPs (dCTP, dGTP, dATP, dTTP) and the two the oligonucleotides and finally the enzyme Taq polymerase. Between the reagents contain air or an inert fluid. Of course is also another mutual order conceivable.
En modifierad reagenskapillär 3 visas i figur 2B. Denna rea- genskapillär är avsedd att införas i ett reaktiqnskärl enligt figur lB. Reagenskapillären skiljer sig från den i figur 2A visade reagenskapillären 3 genom att ett låsspà r 5 är anordnat nedtill pà kapillären. Vidare är en skyddskåpa 15 anordnad över kapillärens övre ände. Reaktionskärlet enligt figur lB och reagenskapillären enligt figur 2B förvaras för sig tills användning. Vid använding trycks kapillärens 3 nedre ände genom det permeabla membranet 4b i reaktionskärlets 1 lock 4, varvid là sspáret 5 kommer till ingrepp med den av borrningen 4a bildade stoppkragen. Skyddskápan 15 skyddar innehållet i reagenskapil-1ä- ren 3 från kontamination vid insättnings- och intrycknings- förloppet i reaktionskärlet 1. När reagenslösningarna i reagens- kapillären 3 har tinat, centrifugeras det ner och blandas med varandra och i förekommande fall med utspädningsmedlet 2 i kärlets l botten. Efter centrifugering kan locket 4 öppnas utan att kapillären 3 behöver avlägsnas från locket. Fördelen med detta är att man bekvämt kan tillsätta respektive uttaga material från reaktionskärlet om så skulle önskas.A modified reagent capillary 3 is shown in Figure 2B. This rea- is intended to be introduced into a reaction vessel according to Figure 1B. The reagent capillary differs from that in Figure 2A showed the reagent chiller 3 by arranging a locking groove 5 at the bottom of the capillary. Furthermore, a protective cover 15 is arranged above the upper end of the capillary. The reaction vessel of Figure 1B and the reagent capillary of Figure 2B is stored separately until use. In use, push the lower end of the capillary 3 through the permeable membrane 4b in the lid 4 of the reaction vessel 1, wherein the locking groove 5 engages with the one formed by the bore 4a stop collar. The protective cover 15 protects the contents of reagent wedges clean 3 from contamination during insertion and depression process in the reaction vessel 1. When the reagent solutions in the reagent the capillary 3 has thawed, centrifuged it down and mixed with each other and, where appropriate, with the diluent 2 i the bottom of the vessel. After centrifugation, the lid 4 can be opened without that the capillary 3 needs to be removed from the lid. The advantage of this is that you can conveniently add or remove materials from the reaction vessel if desired.
Ett föredraget beredningssätt av reagenskapillärerna 3 beskrivs i anslutning till figur 3. Reagenskapillärerna 3, som lämpligen är tillverkade av inert plast, förbinds till varsin sugkälla 16, t.ex. en kolvpipett, vilka i sin tur är anslutna .till en datoriserad robotenhet 17. Kapillärernas 3 mynningar doppas ned i behÃ¥llare innehÃ¥llande olika reagenslösningar 6-14 där kolvarna som manövreras av den datoriserade robotenheten suger upp en viss mängd reagens, som är beräknad för en viss typ av PCR-reaktion. 465 G86 6 I den visade utföringsformen är reagens 6 PCR-buffert, reagens 7, 8, 9, 10 de fyra dNTP:erna dCTP, dGTP, dATP, dTTP, reagens ll, 12 tvÃ¥ olika primers (oligonukleotider) för en specifik PCR- reaktion och reagens 13 Taq-polymeras och reagenslösning 14 ett valfritt ytterligare reagens. Därefter förflyttas kapillärerna relativt nästa, intilliggande behÃ¥llare samtidigt som luft eller inert gas sugs in under det första reagenset. I den i figur 3 visade utföringsformen är reagenslösningarna anordnade i cirkulärt belägna behÃ¥llarsektorer men det är naturligvis tänkbart att även anordna behÃ¥llarna efter varandra pÃ¥ rad (-er). En första cykel är fullbordad när samtliga reagens 6-13, och valfritt 14, har sugits upp i kapillärerna. En komplett reagenskapillär 3 bildas vid varje cykel. Ãfter avslutad cykel avskiljs de färdigberedda reagenskapillärerna 3 frÃ¥n sugkällorna 16 i fryst tillstÃ¥nd och nya, tomma kapillärrör förbinds med sug- källorna. Vid användning av längre kapillärer 3 är det möjligt att erhÃ¥lla flera sammanhängande reagenskapillärer 3, varvid antalet kompletta reagenskapillärer motsvarar antalet cykler. När pÃ¥fyllningen av kapillärerna med reagens och mellanliggande lager av luft eller inert fluidum har avslutats, avskiljs de frÃ¥n pipettkolvarna och förvaras frysta. Hela förloppet sker vid en sÃ¥dan temperatur att de uppsugna reagenslösningarna fryses när de sugs in i kapillärerna och förloppet utförs sterilt i ett slutet system. Naturligvis är det även möjligt att lägga in ett separat frysningssteg av kapillärerna efter att dessa har färdig- preparerats.A preferred method of preparation of the reagent capillaries 3 is described in connection with Figure 3. The reagent capillaries 3, as appropriate are made of inert plastic, each connected to a suction source 16, for example a piston pipette, which in turn are connected .to one computerized robot unit 17. The 3 mouths of the capillaries are immersed in containers containing different reagent solutions 6-14 containing the flasks which is operated by the computerized robot unit sucks up a certain amount of reagent, which is calculated for a particular type of PCR reaction. 465 G86 6 In the embodiment shown, reagent 6 is PCR buffer, reagent 7, 8, 9, 10 the four dNTPs dCTP, dGTP, dATP, dTTP, reagent ll, 12 different primers (oligonucleotides) for a specific PCR reaction and reagent 13 Taq polymerase and reagent solution 14 a optionally additional reagent. The capillaries are then moved relative to the next, adjacent container at the same time as air or inert gas is sucked in during the first reagent. In the one in Figure 3 shown embodiment, the reagent solutions are arranged in circularly located container sectors but it is natural conceivable to also arrange the containers one after the other in a row (-your). A first cycle is completed when all reagents 6-13, and optionally 14, have been aspirated into the capillaries. A complete reagent capillary 3 is formed at each cycle. After the cycle is completed separate the ready-made reagent capillaries 3 from the suction sources 16 in the frozen state and new, empty capillary tubes are connected to suction the sources. When using longer capillaries 3 it is possible to obtain several contiguous reagent capillaries 3, wherein the number of complete reagent capillaries corresponds to the number of cycles. When filling the capillaries with reagents and intermediate layers of air or inert fluid have been terminated, they are separated from pipette flasks and store frozen. The whole process takes place at one such a temperature that the aspirated reagent solutions freeze when they are sucked into the capillaries and the procedure is performed sterile in one closed system. Of course, it is also possible to add one separate freezing step of the capillaries after they have prepared.
Efter'nedfrysning segmenteras långa kapillärer, d.v.s. sådana som rymmer mer än en omgång reagens 6-13, med hjälp av en kniv, t.ex. byggd som en irisbländare för att minimera deformering, till önskad längd, dvs en cykel-längd som innehåller alla reagensen 6-13, och så att ändarna av reagenskapillärerna ej skadas.After freezing, long capillaries are segmented, i.e. such as holds more than one batch of reagents 6-13, using a knife, e.g. built as an iris diaphragm to minimize deformation, to desired length, i.e. a cycle length containing all the reagents 6-13, and so that the ends of the reagent capillaries are not damaged.
Reagenskapillärerna 3 kan förpackas direkt, alternativt placeras i sterila reaktionskärl 3, företrädesvis Eppendorfrör, enligt figur 2A. Naturligvis sker även detta förlopp sterilt. '- 465 086 f 7 Ett alternativt beredningssätt av'reagenskapillärerna är att låta varje sugkälla 16 suga upp ett och samma reagens i kapillärerna och därefter segmentera kapillärerna i små bitar, vart och ett innehållande en viss volym och ett visst reagens. Vid en PCR- reaktion placeras då åtta olika sådana reagensbitar i Eppen- dorfrör.The reagent capillaries 3 can be packaged directly, or alternatively placed in sterile reaction vessels 3, preferably Eppendorf tubes, according to Figure 2A. Of course, this process also takes place sterile. '- 465 086 f 7 An alternative method of preparing the reagent capillaries is to let each suction source 16 sucks up one and the same reagent in the capillaries and then segment the capillaries into small pieces, each one containing a certain volume and a certain reagent. In a PCR reaction, eight different such reagent pieces are then placed in Eppen- dorfrör.
Reagenskapillärerna eller hela reaktionskärlet l förvaras i fryst tillstà nd tills användning. Vid användning tinas reaktionskärlet och innehållet i reagenskapillären respektive kapillärbitarna 3 centrifugeras ned, varvid det blandas med vattnet. Därefter till- sätts endast provet för PCR-reaktionen och provet är redo för att köras i amplifieringsapparaten.The reagent capillaries or the entire reaction vessel 1 are stored frozen condition until use. In use, the reaction vessel is thawed and the contents of the reagent capillary and capillary pieces, respectively 3 centrifuged down, mixing with the water. Then add only the sample is set for the PCR reaction and the sample is ready to run in the amplifier.
Taq-polymeras är känsligt för inhibering och för att undvika falskt negativa resultat 'kan man därför preparera speciella kapillärer som fungerar som positiva kontroller. Sådana inne- håller värdspecifika primers och ger sålunda positiva resultat om amplifieringen har fungerat.Taq polymerase is sensitive to inhibition and to avoid false negative results' can therefore be prepared special capillaries that act as positive controls. Such contents holds host-specific primers and thus gives positive results if the amplification has worked.
Det inses att reagenskapillärerna 3 är preparerade för en speciell provvolym och en speciell PCR-reaktion, t.ex. ett HIV- test. Andra PCR-tester kräver andra volymer och andra oligo- nukleotider. Föreliggande beredningsförfarande är tänkt för in- dustriell skala men det är naturligvis även tänkbart att tillverka egna kapillärer manuellt i labskala.It will be appreciated that the reagent capillaries 3 are prepared for one special sample volume and a special PCR reaction, e.g. an HIV Test. Other PCR tests require different volumes and other oligo- nucleotides. The present preparation procedure is intended for industrial scale but it is of course also conceivable that manufacture own capillaries manually on a lab scale.
Enligt föreliggande uppfinning undviks ett flertal moment, t.ex. pipetteringar, pipettspetsbyte, handskbyte, upprepad öppning och stängning av reaktionskärlen, varigenom antalet felkällor reducerats väsentligt och testerna blir tillförlitligare, snabbare och billigare. Problemet med falskt positiva rewultat vid PCR reduceras därmed väsentligt. r Det bör framhållas att föreliggande uppfinning även.kan tillämpas inom andra biotekniska områden än PCR. Detta gäller standardise- 465 086 8 rade reaktioner där reagensen inte kan blandas i förväg och är tidskrävande att preparera.According to the present invention, a number of steps are avoided, e.g. pipetting, pipette tip change, glove change, repeated opening and closure of the reaction vessels, thereby increasing the number of sources of error significantly reduced and the tests become more reliable, faster and cheaper. The problem of false positive results in PCR is thus significantly reduced. r It should be noted that the present invention may also be applied in biotechnological fields other than PCR. This applies to standardized 465 086 8 reactions where the reagents cannot be premixed and are time consuming to prepare.
Uppfinningen erbjuder därmed den biotekniska industrin möjlig- heten att tillhandahålla en ny typ av s.k. kits, d.v.s kompletta satser med reagens för en viss reaktion. Sådana kits finns i stort antal på marknaden idag, och består oftast av Eppendorfrör med olika reagens som räcker till ca 100 standardreaktioner. Man blandar för varje reaktion en viss volym ur varje rör. Med hjälp av reagenskapillärer kan ett kit innehålla t. ex. 500 kapillärer vart och ett färdigt att använda till den avsedda reaktionen.The invention thus offers the biotechnology industry the opportunity to the ability to provide a new type of so-called kits, i.e. complete batches of reagents for a particular reaction. Such kits are available in large number on the market today, and usually consists of Eppendorf tubes with different reagents sufficient for about 100 standard reactions. MAN mixes for each reaction a certain volume from each tube. With help of reagent chillers, a kit may contain e.g. 500 capillaries each ready to use for the intended reaction.
Fördelen med kits baserade på de i föreliggande ansökan.beskrivna reagenskapillärerna, är att användaren slipper pipettera reagensen, och.kan istället med fingrarna eller med pincett välja adekvat reagenskapillär för den avsedda reaktionen. Förenklingen är uppenbar framförallt när det gäller hantering av radioaktiva reagens, då.man ej riskerar kontaminering av pipetter, får mindre radioaktivt riskavfall och kortare exponeringstider för persona- len. Till ekonomiska och funktionella fördelar med reaktions- kapillär inom PCR-tekniken kan alltså läggas tidsbesparingar och arbetarskyddsfördel inom flera biotekniska områden.The advantage of kits based on those described in the present application reagent capillaries, is that the user does not have to pipette the reagents, and.can instead with the fingers or with tweezers choose adequate reagent capillary for the intended reaction. The simplification is obvious especially when it comes to handling radioactive reagents, then.you do not risk contamination of pipettes, get less radioactive hazardous waste and shorter exposure times for len. To the economic and functional benefits of reaction capillaries in PCR technology can thus be added time savings and occupational safety benefit in several biotechnological areas.
Claims (10) Translated from Swedish4; 465 086 f PATENTKRAV4; 465 086 f PATENT REQUIREMENTS 1. Förfarande för att genomföra biokemiska reaktioner där reagensen inte kan blandas i förväg, i vilket en reagenskapillär (3) fylld med frÃ¥n varandra Ã¥tskilda reagens (6-13) används, k ä n~n e t e c k n a t av att reagenskapillären (3) sticks in i en borrning (4a) i locket (4) av ett reaktionskärl (1), att reaktionskärlet (1) med insatt kapillär (3) centrifugeras sÃ¥ att reagenskapillärens (3) innehÃ¥ll hamnar i botten\ av reaktions- kärlet (1), och â att prov tillsätts till reaktionskärlet (1).A process for carrying out biochemical reactions in which the reagents cannot be mixed in advance, in which a reagent capillary (3) filled with separated reagents (6-13) is used, characterized in that the reagent capillary (3) is inserted into a bore (4a) in the lid (4) of a reaction vessel (1), that the reaction vessel (1) with inserted capillary (3) is centrifuged so that the contents of the reagent capillary (3) end up in the bottom \ of the reaction vessel (1), and ' that samples are added to the reaction vessel (1). 2. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t av att reagenslösningarna (6-13) är frysta och att de tinas innan reagenskapillären sticks in i borrningen (4a).Method according to claim 1, characterized in that the reagent solutions (6-13) are frozen and that they are thawed before the reagent capillary is inserted into the bore (4a). 3. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t av att en skyddskÃ¥pa (15) sätts pÃ¥ reagenskapillärens (3) övre ände innan den nedre änden förs in i borrningen (4a), vilken nedre ände förs sÃ¥ lÃ¥ngt ner i reaktionskärlet (1) att ett lÃ¥sspà r (5) pÃ¥ kapillären kommer till anliggning mot borrningens (4a) kanter.Method according to claim 1, characterized in that a protective cover (15) is placed on the upper end of the reagent cap (3) before the lower end is inserted into the bore (4a), which lower end is moved so far down into the reaction vessel (1) that a locking groove (5) on the capillary comes into contact with the edges of the bore (4a). 4. Förfarande enligt krav 3, k ä n n e t e c k n a d av att reagenskapillären (3) sticks igenom ett permeabelt membran (4b), som täcker borrningen (4a).Method according to claim 3, characterized in that the reagent capillary (3) is inserted through a permeable membrane (4b), which covers the bore (4a). 5. Kombination av reagenskapillär och reaktionskärl, k ä n- n e t e c k n a d av dels en reagenskapillär (3) innehÃ¥llande olika reagenslösningar (6-13) i pÃ¥ förhand. bestämda.:volymer Ã¥tskilda frÃ¥n varandra av luft eller ett inert fluidum och dels ett reaktionskärl (1) innefattande ett lock (4) försett med en 465 086 10 borrning (4a), varvid reagenskapillären (3) är avsedd att införas in i. borrningen (4a) i. reaktionskärlets (1) lock (4) vid användning.5. Combination of reagent capillaries and reaction vessels, characterized by a reagent capillary (3) containing different reagent solutions (6-13) in advance. volumes separated by air or an inert fluid and a reaction vessel (1) comprising a lid (4) provided with a bore (4a), the reagent chiller (3) being intended to be inserted into the bore. (4a) i. Lid (4) of the reaction vessel (1) in use. 6. Kombination enligt krav 5, k ä n n e t e c k n a t av att reagenslösningarna (6-13) är frysta och att de tinas innan reagenskapillären (3) förs in i borrningen (4a).Combination according to claim 5, characterized in that the reagent solutions (6-13) are frozen and that they are thawed before the reagent chiller (3) is inserted into the bore (4a). 7. Kombination enligt krav 5 eller 6, k ä n n e t e c k- n a d av att reagenskapillären (3) är försedd med ett lÃ¥sspÃ¥r (5) vid den nedre änden och ett skyddselemeñt (15) vid den övre änden.Combination according to Claim 5 or 6, characterized in that the reagent chiller (3) is provided with a locking groove (5) at the lower end and a protective element (15) at the upper end. 8. Kombination enligt krav 5, 6 eller 7, k ä n n e t e c k n a- d av att borrningen (4a) är täckt av ett permeabelt membran (4b).Combination according to claim 5, 6 or 7, characterized in that the bore (4a) is covered by a permeable membrane (4b). 9. Kombination enligt nÃ¥got eller nÃ¥gra av kraven 5-8, k ä n n e t e c k n a d av att reagenslösningarna (6-13) innefattar nukleinsyror och/eller enzym för en specifik reaktion.A combination according to any one or more of claims 5-8, characterized in that the reagent solutions (6-13) comprise nucleic acids and / or enzyme for a specific reaction. 10. Kombination enligt krav 9, k ä n n e t e c k n a d av att reagenslösningarna (6-13) innefattar PCR-buffert, dCTP, dGTP, dATP, dTTP, tvÃ¥ eller flera oligonukleotider, varvid samtliga reagens är beräknade för en specifik PCR-reaktion, och termosta- bilt DNA-polymeras. _ ..._ unna-___..Combination according to claim 9, characterized in that the reagent solutions (6-13) comprise PCR buffer, dCTP, dGTP, dATP, dTTP, two or more oligonucleotides, all reagents being calculated for a specific PCR reaction, and thermostatic - bilt DNA polymerase. _ ..._ from -___ ..
SE9001772A 1990-05-16 1990-05-16 RESPONSIBILITIES, REACTIONS, PREPARATION METHOD AND APPLICATION THEREOF SE465086B (en) Priority Applications (10) Application Number Priority Date Filing Date Title SE9001772A SE465086B (en) 1990-05-16 1990-05-16 RESPONSIBILITIES, REACTIONS, PREPARATION METHOD AND APPLICATION THEREOF AT91910180T ATE147789T1 (en) 1990-05-16 1991-05-15 METHOD AND DEVICE FOR CARRYING OUT BIOCHEMICAL REACTIONS EP91910180A EP0530283B1 (en) 1990-05-16 1991-05-15 Method and means to perform biochemical reactions DE69124236T DE69124236T2 (en) 1990-05-16 1991-05-15 METHOD AND DEVICE FOR CARRYING OUT BIOCHEMICAL REACTIONS RU9192016293A RU2082754C1 (en) 1990-05-16 1991-05-15 Method and device for carrying out biochemical reactions AU79715/91A AU660615B2 (en) 1990-05-16 1991-05-15 Method and means to perform biochemical reactions PCT/SE1991/000343 WO1991018110A1 (en) 1990-05-16 1991-05-15 Method and means to perform biochemical reactions CA002082933A CA2082933C (en) 1990-05-16 1991-05-15 Method and means to perform biochemical reactions JP3110423A JPH0646936B2 (en) 1990-05-16 1991-05-15 Methods and means for carrying out biochemical reactions US07/932,122 US5273907A (en) 1990-05-16 1992-08-19 Method and means for perform biochemical reactions Applications Claiming Priority (1) Application Number Priority Date Filing Date Title SE9001772A SE465086B (en) 1990-05-16 1990-05-16 RESPONSIBILITIES, REACTIONS, PREPARATION METHOD AND APPLICATION THEREOF Publications (2) Family ID=20379508 Family Applications (1) Application Number Title Priority Date Filing Date SE9001772A SE465086B (en) 1990-05-16 1990-05-16 RESPONSIBILITIES, REACTIONS, PREPARATION METHOD AND APPLICATION THEREOF Country Status (9) Families Citing this family (14) * Cited by examiner, â Cited by third party Publication number Priority date Publication date Assignee Title WO1993015222A1 (en) * 1992-01-29 1993-08-05 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Method for preventing contamination, in particular in dna and rna amplification techniques US5413924A (en) * 1992-02-13 1995-05-09 Kosak; Kenneth M. Preparation of wax beads containing a reagent for release by heating EP0572057A1 (en) * 1992-05-11 1993-12-01 Johnson & Johnson Clinical Diagnostics, Inc. PCR reagent composition, test kit and methods for amplification and detection with reduced nonspecific amplification of nucleic acids WO1995019447A1 (en) * 1994-01-14 1995-07-20 The Jockey Club Non-invasive sampling method for nucleic acid analysis CA2226717A1 (en) * 1995-07-13 1997-01-30 Immunological Associates Of Denver Self-contained device integrating nucleic acid extraction, amplification and detection EP2275821A1 (en) * 1995-07-31 2011-01-19 Precision System Science Co., Ltd Container DE19624687A1 (en) * 1996-06-20 1998-01-29 Hamilton Bonaduz Ag Process for carrying out chemical, in particular biochemical reactions and pipetting tip, possibly with a reaction vessel SE9702005D0 (en) * 1997-05-28 1997-05-28 Alphahelix Ab New reaction vessel and method for its use ES2153745B1 (en) * 1998-07-31 2001-11-16 Ivia COMPARTMENTED DEVICE AND METHOD FOR CAPTURE AND DOUBLE ENZYMATIC AMPLIFICATION OF NUCLEIC ACID SEQUENCES IN A CLOSED COMPARTMENTED DEVICE ONLY. US6551842B1 (en) 1999-03-26 2003-04-22 Idexx Laboratories, Inc. Method and device for detecting analytes in fluids US6602719B1 (en) 1999-03-26 2003-08-05 Idexx Laboratories, Inc. Method and device for detecting analytes in fluids US6511814B1 (en) 1999-03-26 2003-01-28 Idexx Laboratories, Inc. Method and device for detecting analytes in fluids JP5899624B2 (en) * 2011-02-18 2016-04-06 ã»ã¤ã³ã¼ã¨ãã½ã³æ ªå¼ä¼ç¤¾ Reaction vessel WO2012176598A1 (en) * 2011-06-24 2012-12-27 æ ªå¼ä¼ç¤¾å³¶æ´¥è£½ä½æ Method for separating substance accommodated in vessel Family Cites Families (1) * Cited by examiner, â Cited by third party Publication number Priority date Publication date Assignee Title DD225788A1 (en) * 1984-04-25 1985-08-07 Univ Berlin Humboldt MICROTEST FOR IMPLEMENTING ANALYTICAL PROVISIONSRef document number: 9001772-4
Format of ref document f/p: F
RetroSearch is an open source project built by @garambo | Open a GitHub Issue
Search and Browse the WWW like it's 1997 | Search results from DuckDuckGo
HTML:
3.2
| Encoding:
UTF-8
| Version:
0.7.4